Pureit Exozap - Onestep PCR Clean-UP 500 Reações - Ampliqon

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PCR Clean-up OneStep otimiza seus resultados de sequenciamento. Clean-up fornece resultados em 5 minutos.

Características:
-Protocolo rápido de 5 minutos.
-Não necessita de colunas Spin ou contas magnéticas.
-Tratamento melhora aplicações downstream, como sequenciamento de DNA e análise de SNPs.
-Ideal para a preparação de protocolos em construção de bibliotecas em sequeciamento de última geração (NGS).

Descrição:
O PCR CleanUp PureIT ExoZAP consiste em uma combinação equilibrada entre Exonuclease termolábil I (HL-ExoI) e fosfatase alcalina de camarão recombinante (rSAP).
O tratamento dos produtos da reação de PCR com o PCR CleanUp PureIT ExoZAP remove primers residuais, DNAs de fita única e inativa o excesso de dNTPs por defosforilação. Adicione o PCR CleanUp PureIT ExoZAP diretamente à reação contendo o produto amplificado da PCR. Após o tratamento a 37 °C por, no mínimo, 2 minutos, a PCR CleanUp PureIT ExoZAP se torna completamente inativada por aquecimento a 80 °C pelo menos por 3 minutos.

Protocolo:
Este protocolo funciona como guideline para o clean-up de 5 μl de produtos da PCR utilizando-se a PCR CleanUp PureIT ExoZAP:
- Remova a PCR CleanUp PureIT ExoZAP do freezer a -20 °C.
- Mantenha a PCR CleanUp PureIT ExoZAP sobre o gelo por todo o tempo.
- Agite bem e gradualmente suspenda a agitação.
- Incube a reação a 37 °C de 2 a 5 minutos para degradar os primers remanescentes e DNA de fita única e a fim de inativar nucleotídeos em excesso por defosforilação.
- Incube a 80°C de modo a inativar completamente a PCR CleanUp PureIT ExoZAP de 3 a 10 minutos.
- Os produtos purificados da PCR agora podem ser utilizados para aplicações seguintes, como sequenciamento de DNA, extensão de primers ou análise de SNP.
- Após o tratamento, os produtos da PCR podem ser armazenados a -20 °C.
*Se o tratamento do produto da PCR produzir um volume mais elevado, aumente proporcionalmente a quantidade de PCR CleanUp PureIT ExoZAP.

PCR product of 866 bp was amplified using TEMPase DNA Polymerase in Ammonium Buffer. The PCR product was spiked with dNTP’s and primers and then treated (A) without PureIT ExoZAP PCR CleanUp (B) with PureIT ExoZAP PCR CleanUp (2 +3 min) and (C) with an enzymatic PCR clean-up reagent from a competting brand (1+ 4 min) prior to Sanger sequencing. All samples were analyzed in triplicates and according to manufactures recommendations. Sanger sequencing result was compared by graphically plotting the number of base calls with certain quality values (Phred score). Treatment of PCR products with PureIT ExoZAP significantly improves the quality of DNA sequencing. Furthermore, PureIT ExoZAP PCR CleanUp showed PCR clean-up results equivalent to the competing PCR clean-up reagent. *Data with Quality values less than 10 is not included.