AQ97 High Fidelity DNA Polimerase - Ampliqon - 100 Reações

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A AQ97 High Fidelity DNA Polimerase é uma nova DNA polimerase de revisão desenvolvida e criada pela Ampliqon. A AQ97 High Fidelity DNA Polimerase é composta de uma nova DNA polimerase quimérica com ancestralidade Archaeal, fundida a um domínio de ligação de DNA que aumenta a processabilidade. Juntamente com a amplificação muito rápida e robusta de alvos complexos e longos, AQ97 High Fidelity DNA Polimerase exibe uma alta fidelidade garantindo uma amplificação precisa.

A AQ97 High Fidelity DNA Polymerase é adequada para experimentos de PCR que requerem amplificação com taxas de erro muito baixas, como clonagem/subclonagem, aplicações de sequenciamento de última geração (NGS), análise de SNP e mutagênese.

Características
Alta fidelidade: >60x Taq Fidelity
Alta taxa de amplificação: 10 seg/kb
Atividade de revisão 3’→5’ exonuclease
Capacidade de longo alcance: 18 kb para gDNA
Boa cobertura em amostras de DNA com baixa ou alta quantidade de GC.

AQ97 High Fidelity DNA Polimerase exibe ambas atividades de revisão, atividade endonuclease 5'→3', e atividade exonuclease 3'→5', permitindo que está polimerase corrija incompatibilidades de pares de bases. O Kit AQ97 High Fidelity DNA Polimerase é composto por tampão 5x AQ97 permitindo uma amplificação robusta com alvos de DNA com baixa ou alta quantidade de GC ou alvos longos de DNA. O Kit também inclui um tubo extra de MgCl2 concentrado (25 mM), para ajuste da reação de PCR, caso necessário.

Para amplificações difíceis, como em amostras de DNA ricos em GC, essas com estruturas secundárias complexas ou longas amplificações, recomenda-se adicionar a solução 1-2 M Betaine Enhancer

Para maior conveniência do manuseio AQ97 High Fidelity DNA Polimerase também disponível em 2x master mix.

Fidelidade
A fidelidade da polymerase refere-se a habilidade de inserção da base correta durante o PCR. Ao contrário, a taxa de micro incorporação é conhecida como taxa de erro. A fidelidade depende polimerase, o sistema de tampão em uso e a qualidade da amostra de DNA.

AQ97 HIGH FIDELITY DNA POLYMERASE PROMOVE RUBUSTA AMPLIFICAÇÃO

FIDELIDADE: Os valores de fidelidade de AQ97 High Fidelity, AccuPol DNA Polimerase, high fidelity DNA polimerase P and high fidelity DNA polimerase Q foram comparados com o valor de fidelidade da Taq DNA polimerase (1x). TAXAS DE ERRO: (a) Erros por base por duplicação. Os desvios padrão são dados entre parênteses. As taxas de erro apresentadas podem não ser comparáveis às apresentadas em outros lugares devido a diferenças técnicas e metódicas. (b) As taxas de erro para a AQ97 High Fidelity DNA Polimerase e também para as duas DNA polimerases de High fidelity P e Q ficaram abaixo do limite de detecção para o método usado. Este limite é estimado em 8.4 x 10-6 erros por base por duplicação (60 x fidelidade Taq).

AMPLIFICAÇÃO DE LONGO ALCANCE

A AQ97 High Fidelity DNA Polimerase permite a amplificação de amplicons grandes e complexos. Seis alvos diferentes de DNA genômico humano variando de 2 kb e até 17,5 kb foram usados neste estudo. Os tamanhos do amplicon são indicados na parte superior do gel. O marcador M é High Range DNA Ladder da Ampliqon.

AMPLIFICAÇÃO ROBUSTA

O desempenho do AQ97 High Fidelity foi comparado a três principais DNA polimerase High fidelity (Q, S e P). Oito diferentes alvos de DNA genômico humano, com 400-800 bp de comprimento e com conteúdo de GC variando de 29-78%, foram amplificados. A amplificação robusta foi observada para todos os alvos usando AQ97 High Fidelity DNA Polimerase.

A DNA polimerase high fidelity Q e S fornecem resultados muito semelhantes à AQ97 High Fidelity, exceto no último alvo com o maior conteúdo de GC de 78%. Ao contrário, a DNA polimerase High Fidelity P não foi capaz de fornecer o mesmo nível de amplificação robusta nos alvos de DNA com maior conteúdo de GC, nas condições testadas aqui. Os estudos de amplificação foram configurados, conforme recomendado pelos fabricantes.

Calculadoras de Tm dos respectivos concorrentes foram usadas para calcular as temperaturas de ideal de amplificação para os primers. Ao amplificar alvos ricos em GC, foram incluídos na mistura de reação solução 2 M Betaine Enhancer Solution (AQ97 DNA Polimerase), GC enhancer (Competidor Q e S) ou tampão de PCR específico rico em GC (competidor P).